1. 自動(dòng)洗板機(jī):每孔加入洗滌液350μl,注入與吸出間隔60秒。洗板5次。
2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350μl,浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品配制時(shí),均需充分混勻,并盡量避免起泡。
1.加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體,甩干,每個(gè)孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育1小時(shí)。
3.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約350μl /每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,加上覆膜,37℃溫育1小時(shí)。
5.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6.每孔加底物溶液100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長(zhǎng),但不可超過(guò)30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí),即可終止)。
7.每孔加終止液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開(kāi)酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測(cè)程序。
9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
gp130結(jié)合蛋白GAM抗體
繆勒激素2型受體抗體
激活素受體1A抗體
激活素受體2A抗體
激活素受體2B抗體
2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框88抗體
G蛋白偶聯(lián)受體ARHGEF18抗體
激活素受體1B抗體
雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體
淀粉樣肽前體蛋白抗體(C端)
腺苷酸環(huán)化酶2抗體
載脂蛋白C3抗體
載脂蛋白E4抗體
自噬相關(guān)基因AMBRA1抗體
磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體
磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體
磷酸化細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1抗體
磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體
脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體
磷酸化細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1抗體
磷酸化細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1抗體
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體
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