探針法qPCR試劑盒的特點:
1、定量準確、實驗耗時短
從探針法qPCR原理可以看出,擴增引物和探針序列都匹配后擴增的產(chǎn)物才能產(chǎn)生熒光信號,這樣就確保了熒光信號是目的片段的擴增產(chǎn)生的,排除了非特異性擴增的影響,特別是針對一些低拷貝和低濃度的樣品,檢測結(jié)果所見即所得,從而保證了檢測的準確性。因探針法qPCR的高特異性,因此無需再設(shè)置熔解曲線檢測擴增產(chǎn)物的特異性如何,有效縮短了實驗時間。
2、特異性高
在探針法qPCR中,除加入引物外還增加一條特異性探針,當引物和探針都與靶基因結(jié)合時,擴增時探針才會被水解酶切發(fā)出熒光。當引物發(fā)生非特異性擴增時,探針不會結(jié)合到非特異性片段上,因此不會被水解酶切而發(fā)出熒光,從而提高了特異性。
3、兼容多重反應(yīng)
在探針的5'端標記不同的熒光修飾,則不同的探針在檢測過程中就會發(fā)出不同的熒光信號。根據(jù)此原理可以將檢測不同目的基因或者基因型的探針標記不同的熒光修飾做混合檢測,這樣就可以做多重檢測,檢測對應(yīng)的熒光信號就是檢測對應(yīng)探針的熒光定量結(jié)果。多重檢測大大節(jié)省了檢測的物料試劑成本,也大大節(jié)省了檢測時間,進一步提高了檢測的速度和適用性。
探針法qPCR試劑盒的實驗注意事項:
1)PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。