1、儀器質控
為使儀器保持*工作狀態(tài),應建立維護和校正儀器的標準操作程序(SOP),所要控制的儀器包括移液器(加樣槍)、溫箱、洗板機和酶標儀。
◎移液器: ELISA試劑盒加樣量?。?0-200μl),其準確性直接影響實驗結果,利用稱重法檢查:低、中、高三個刻度分別吸取指示量的水,萬分之一天平稱重后計算吸量是否準確,一般應在±5%以內;
◎恒溫箱: 經(jīng)常檢查恒溫箱溫度計所示的溫度和水中(或溫箱內)實測溫度是否一致,允許有±1℃的誤差;
◎洗板機: 每個設置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定,一般不超過2μl;人工扣板時,墊紙不濕;定期檢查管孔是否堵塞;
◎酶標儀:經(jīng)常維護其光學部分,防止濾光片霉變,定期檢測校正,使其保持良好的工作性能。
2、試劑盒選擇
◎應盡量選擇正規(guī),產(chǎn)品經(jīng)相應政府部門審核認可,試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、安全性及經(jīng)濟性全面評價。
◎靈敏度:有二層含義,1)為試劑檢出被檢物質的zui低量的能力;2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。
◎特異性:常用交叉反應率表示。含有與待測物相近結構部份的物質可能存在交叉反應,使測定結果升 高,可能導致假陽性,所以交叉反應是評價其質量的關鍵指標。
◎精密度:ELISA試劑盒一般指其批內CV%,其值應小于15%;定量試劑應同時考察線性范圍。
◎準確度:通過添加回收實驗進行評價。
◎簡便性:指在不影響試劑的前三項指標的前題下,實驗和測定步驟越少越好,在定性實驗中結果判斷簡單明了,定量試驗結果計算也應簡單。
◎安全性:指試劑對操作者和環(huán)境安全無害無傳染性。
◎經(jīng)濟性:試劑在同等質量條件下通過大規(guī)?;蚣夹g進步降低成本,而市場價格比較合理。
◎試劑評價:需要有的確證方法和確證的樣品進行檢測。
3、樣本前處理注意事項
3.1 均質
組織樣本:肉、肝食品類切細,用絞肉機反復絞碎,混合均勻。
水產(chǎn)樣本:去除樣品的非食用部分,食用部分切細,用均質器均漿;原料表面較臟時,需適當用蒸餾水清洗。
蛋類:鮮蛋去殼,蛋黃和蛋白充分混勻。
水果、蔬菜類:先用水洗去泥沙,然后除去表面的水分,取食用部分。
3.2 振蕩提取
將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中,振蕩,使提取溶劑與容器內的樣品充分接觸以深入到樣本組織內部,提取待測組分。
3.2.1振蕩方式:振蕩器上進行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。
3.2.2 在組織樣本中加入有機溶劑之間提取時,應邊加邊振蕩,防止組織凝結成團,不利于提取。
3.3. 在用有機溶劑提取過程中,如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,解決的方法有:①用細頭輕輕的攪拌,破壞乳化后,再重復離心。②再加入適量的提取劑,重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。
3.4 濃縮
由于凈化過程中引入的溶劑,可能會降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析,需要去除全部有機溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮氣下吹干,再用復溶液溶解干燥殘留物。
濃縮方式:
ELISA試劑盒氮氣吹干除雜、壓縮空氣吹干除雜。
注意:
3.4.1在吹干樣本之前,用甲醇清洗針頭,防止雜質干擾。
3.4.2在吹樣本時,針頭應在液面上空,避免與樣本接觸,防止產(chǎn)生交叉污染。
3.4.3樣本吹干后應立即取下,避免吹的時間過長,影響zui終檢測結果。
3.4.4不同的藥物,吹干后樣本的保質期不同,提倡待樣本回到室溫后立即復溶。
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