注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:麻疹病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格
英文名稱:Measles VirusRTPCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
麻疹病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
乙二胺鹽酸鹽/鹽二鹽酸乙二胺/Ethylenediamine dihydrochlorideAR,99.5%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,333-18-6RT
鹽酸羥胺/氯化羥胺/氫氯羥胺/羥基氯化銨/鹽酸胲/羥基氯化胺/羥胺酸/羥胺鹽酸/Hydroxylammonium chlorideAR,98.5%100克國(guó)產(chǎn)1304222RT
鹽酸三乙醇胺/三乙醇胺鹽酸鹽/2,2',2''-次氮基三乙醇鹽酸鹽/Triethanolamine hydrochlorideCP,99%100克國(guó)產(chǎn)637-39-8RT,避光
乙酰胺/醋酰胺/AcetamideAR,98.5%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,60-35-5RT
乙?;阴1桨?N-乙?;阴1桨?3-氧-N-苯基丁酰胺/3-氧代-N-苯基丁酰胺/α-乙酰代乙酰苯胺/乙酰代乙酰苯胺/ N-乙酰乙酰苯胺/3-氧代-N-苯基丁酰胺/AAA/AcetoacetanilideCP,98%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,102-01-2RT
N-苯甲酰-N-苯基羥胺/苯甲酰苯基羥胺/N-苯甲酰苯胲/N-苯甲?;交u胺/苯基羥胺/N-苯基苯甲酰羥肟酸/鉭試劑/ N-苯甲酰苯羥胺/N-羥基-N-苯基苯甲酰胺/苯甲酰替苯替羥胺/BPHA/BPACP,98%10克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,304-88-1RT
4-氯乙酰苯胺/對(duì)氯苯/對(duì)氯苯乙酰苯胺/4′-Chloroacetanilide特純,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,539-03-7RT
碳酸環(huán)己胺/環(huán)己胺碳酸鹽/CHCCP,98%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,20190-03-8RT
1,1-二蒽醌亞胺/二蒽亞胺/1,1′-聯(lián)蒽醌亞胺/1,1ˊ-亞氨基二蒽醌/1,1′-Dianthrimide特純,98%10克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,82-22-4RT
N,N-二乙基甲酰胺/二乙基甲酰胺/N,N-Diethylformamide特純,99%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,617-84-5RT,避光
二正辛胺/二辛基胺/N,N-二(甲基庚基)胺/雙(α-辛基)胺/二正辛基胺/Di-n-octylamineAR,98%25毫升國(guó)產(chǎn)1120-48-5RT
二苯基聯(lián)苯胺/N,N'-二苯基聯(lián)苯胺/N,N-二苯對(duì)苯二氨基聯(lián)苯/ N,N'-二苯基聯(lián)苯二胺/N,N'-二苯對(duì)氨基聯(lián)苯/N,N'-Diphenylbenzidine特純,97%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,531-91-9RT,避光
乙胺鹽酸鹽/乙基氯化銨/鹽酸一乙胺/一乙胺鹽酸鹽/鹽酸乙胺/氯化乙基氨/Ethylamine hydrochlorideCP,98%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,557-66-4RT
1,7-庚二胺/1,7-二氨基庚烷/七亞甲基二胺/庚亞甲基二胺/1,7-庚烷二胺/1,7-Diaminoheptane特純,98%5克進(jìn)分646-19-52~8℃
麻疹病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格HEXAFLUOROBENZENE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Formononetin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
7-Bromoheptanenitrile 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
Ursodeoxycholic acid 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,BR,無(wú)
Zinc citrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Acid Turquoise Blue 質(zhì)量規(guī)格:僅供鑒別用
Matrine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Diisopropyl malonate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
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