注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:青蟹雙順?lè)醋硬《綪CR檢測(cè)試劑盒價(jià)格
英文名稱:Mud Crab Dicistrovirus (MCDV)PCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
青蟹雙順?lè)醋硬《綪CR檢測(cè)試劑盒價(jià)格原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
亞硫酸銨/亞硫酸銨一水物/Ammoninm nickel sulfate monohydrateAR,94%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,2149028RT
鎢酸銨/仲鎢酸銨/偏鎢酸銨/(七縮)十二鎢酸十銨/偏鎢酸銨/氧化鎢銨/APTAR,85%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,11120-25-5RT
五硼酸銨/七縮五硼酸銨/硼酸銨/Ammonium pentaborateAR,99%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,12007-89-5RT
檸檬酸氫二銨/枸櫞酸氫二銨/二堿式檸檬酸銨/檸檬酸二銨/檸檬酸氫銨/2-羥基-1,2,3-丙三羧酸二銨鹽/Ammonium citrate dibasicAR,99%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,3012-65-5RT
檸檬酸鐵銨/枸櫞酸鐵銨/2-羥基-1,2,3-丙三羧酸鐵(III)銨鹽/Ammonium ferril citrate brownCP,20.5%,棕色500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,1185-57-5RT,避光
甲酸銨/蟻酸銨/甲酸銨鹽/Ammonium formateAR,98%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,540-69-2RT
吡咯烷二硫代甲酸銨鹽/四亞甲基二硫代氨基甲酸銨/1-吡咯烷二硫代羧酸銨鹽/吡咯烷二硫代氨基甲酸銨/1-吡咯烷硫代羧酸銨鹽/四次甲基二硫代氨基甲酸銨/APDC/PDC/PDTCAR,99%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,5108-96-3RT
酒石酸銨/2,3-二羥基-[R-(R*,R*)]-丁二酸二銨鹽/L-酒石酸銨/Ammonium tartrateAR,99%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,3164-29-2RT
芐基三乙基氯化銨/基三乙銨/三乙基芐基氯化銨/BTEAC/TEBACCP,98%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,56-37-1RT
聚乙烯醇磷酸銨/Ammonium alcohol polyvinyl phosphateAR,99%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,RT,避光
硫酸鈰銨/硫酸銨鈰/硫酸鈰(Ⅳ)銨/Ammonium ceric sulfateAR,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,CAS:7637-03-8RT
羥胺溶液/羥胺50%水溶液/羥胺/胲/Hydroxylamine solutionBR,50%100毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,7803-49-8RT
硫酸鎂/結(jié)晶硫酸鎂/苦鹽/硫苦/瀉利鹽/七水硫酸鎂/鐵精礦/Magnesium sulfate heptahydrateAR,99%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,10034-99-8RT
無(wú)水硫酸鎂/硫酸鎂/瀉鹽/Magnesium sulfateAR,98%500克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,7487-88-9RT
青蟹雙順?lè)醋硬《綪CR檢測(cè)試劑盒價(jià)格1227 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%
METHYL 2-HYDROXY-3-NITROBENZOATE 質(zhì)量規(guī)格:>90%,BR
3-Chloropropyltrimethoxysilane 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
ANISE OIL 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
5,7-Dihydrox -4'-methoxyisoflavone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
N-(4-Aminobutyl)-N-ethylisoluminol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
4-TERT-BUTYLTHIOPHENOL 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Lithium acetoacetate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
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